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基于毛细管电泳的日本落叶松MSAP反应体系的建立

作者: 刁姝 孙超 孙晓梅 张守攻    中国林业科学研究院林业研究所、国家林业局林木培育重点实验室 北京100091

关键词: DNA甲基化 甲基化敏感扩增多态性(MSAP) 毛细管电泳 体系建立 日本落叶松

摘要:[目的]建立基于毛细管电泳的日本落叶松最佳MSAP反应体系,获得条带清晰,信号强度均一的DNA甲基化图谱,为今后开展日本落叶松表观遗传变异研究奠定基础。[方法]以日本落叶松未成熟木质部为试材,设置不同梯度的DNA模板用量以及选择扩增体系中引物浓度、Mg^2+浓度、dNTP浓度和exTaq DNA聚合酶浓度,确定各组分不同用量对毛细管电泳效果的影响,从而确立最适的MSAP反应体系。[结果]结果表明模板DNA以及exTaqDNA聚合酶浓度对毛细管电泳结果影响不明显,而高的引物浓度会引起条带的减少。Mg^2+及dNTP浓度是影响毛细管电泳结果最为关键的因素,浓度过低或过高会导致毛细管电泳图谱条带明显减少,杂峰显著增多。[结论]最终确立的反应体系为:DNA模板100ng,引物0.75pmol·μL^-1,Mg^2+ 2mmol·L^-1,dNTP0.375mmol·L^-1和exTaqDNA聚合酶0.05U·μL^-1。


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